KeyLaboratoryofBiodiversityFormationMechanismandComprehensiveUtilizationofQinghai-TibetanPlateauinQinghaiProvince

概述

OVERVIEW

FoodScienceNutrition（IF=2.）上刊载了ByongWonLee研究团队（E-mail:bwlee

korea.kr）发表的“Antioxidantandanti-inflammatoryeffectsofPeanut(ArachishypogaeaL.)skinextractsofvariouscultivarsinoxidative-damagedHepG2cellsandLPS-inducedraw.7macrophages”，该研究表明花生红衣提取物有效提高氧化应激诱导的HepG2细胞活性氧生成、丙二醛浓度和抗氧化酶活性，并降低脂多糖刺激的RAW.7巨噬细胞中促炎因子的表达。

前言TNTRODUCTION

细胞活性氧水平的增加超过了细胞防御所能承受的水平，就会导致氧化应激。高水平的活性氧会改变氧化还原稳态，导致氧化应激，从而损害细胞蛋白质、脂质和脱氧核糖核酸。氧化应激被认为与衰老和几种退行性疾病的发病机制有关，如心血管和炎症疾病、糖尿病和癌症。此外，炎症反应是对局部损伤或感染的复杂反应，涉及各种免疫细胞和许多介质。虽然急性炎症对于对抗感染和组织修复至关重要，但过度和不受控制的炎症通常与慢性疾病有关，如代谢紊乱、动脉粥样硬化和某些类型的癌症。食物多酚在预防心血管疾病和某些类型的癌症中的作用已得到公认。种子的副产品，如巴西坚果、杏仁的皮已被报道为多酚和抗氧化剂的丰富来源。花生是许多国家广泛种植的重要油料作物，也是全球消费的重要食品材料。尽管花生皮只占种子总量的一小部分，但作为副产品，它每年被丢弃7.5×吨，花生皮中含有多种丰富的多酚类化合物，如类黄酮、酚酸、原花青素和花青素，含量约为90-毫克/克干皮。已开发的花生品种在花生皮中具有不同的特性和酚类化合物特征，然而缺乏对HepG2细胞和RAW.7巨噬细胞的抗氧化和抗炎作用的研究。此研究的目的是(a)研究4个花生品种皮中酚类化合物的组成，以及它们对叔丁基过氧化氢(TBHP)诱导的HepG2细胞氧化应激和LPS刺激的RAW.7巨噬细胞的抗氧化和抗炎作用，以及(b)评价酚类化合物与抗氧化和抗炎特性之间的相关性，以鉴定花生皮中的标记化合物。

方法METHOD

酚类化合物的测定

总多酚和类黄酮的含量是根据Dewonto等人的方法测定的。结果表示为每克花生皮中没食子酸和儿茶素当量的毫克数(毫克GAE/克花生皮，毫克CE/克花生皮)。使用香草醛-硫酸法测量总原花青素水平。结果以每克花生皮中儿茶素当量的毫克数表示(毫克CE/克花生皮)。基于报道的酸碱度差法测定总花青素含量；这些结果以每克花生皮中矢车菊素-3-葡萄糖当量的毫克数表示(毫克C3GE/克花生皮)。通过高效液相色谱法测定每种提取物的酚酸和花青素组成。

抗氧化活性

测量了1，1-二苯基-2-苦基肼基(DPPH)和2，2-氮杂(3-乙基苯并噻唑基)-6-磺酸(ABTS)的自由基清除活性。两种自由基清除活性均表示为与Trolox相当的抗氧化能力(TEAC)，单位为毫克TE/克提取物残渣(ER)。此外，测量铁还原抗氧化能力测定；结果以mMFe2+当量表示。

对氧化损伤的HepG2细胞的保护作用

人肝癌HepG2细胞保存在DMEM培养基中，补充10%胎牛血清、单位/毫升青霉素和50微克/毫升链霉素，温度为37℃，培养箱中二氧化碳浓度为5%。使用3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四氮唑胺(MTT)测定法测量人肝癌HepG2细胞死亡。为了确定对氧化应激的细胞保护作用，将HepG2细胞接种在密度为1.5×细胞/孔的96孔板中。24小时后，培养基(毫升/孔)被含有不同浓度提取物的无FBS培养基(毫升/孔)代替，12小时后，丢弃含有提取物的培养基，用含有毫摩尔/升TBHP的培养基(毫升/孔)处理细胞3小时，以诱导氧化应激。用MTT法评估提取物的保护作用。用DCFH-DA荧光探针定量细胞内活性氧水平。用荧光分光光度计在纳米的激发波长和纳米的发射波长下测量对应于细胞内活性氧生成的荧光强度2小时。测定脂质过氧化和抗氧化酶活性，使用VCX超声波仪收获细胞并裂解10秒，裂解物在4℃下以10，×g离心10分钟，上清液用于蛋白质和脂质过氧化以及根据Ham等人的方法进行抗氧化酶测定。

脂多糖诱导的RAW.7细胞

该细胞系保存在DMEM，补充有10%胎牛血清、单位/毫升青霉素和50微克/毫升链霉素，温度为37℃，培养箱中二氧化碳浓度为5%。RAW.7使用3-(4，5-二甲基噻唑2-基)-2，5-二苯基四氮唑胺(MTT)测定细胞死亡。细胞毒性计算为对照细胞活力的百分比。将RAW.7细胞(5×细胞/孔)接种在96孔板中，并在37℃孵育6小时。用或不用LPS(0.5μg/ml)和大豆蛋白提取物的指示浓度处理细胞24小时。然后，分别使用Griess试剂系统和CymaxTM小鼠细胞因子ELISA测定试剂盒测量培养基中NO、TNF-α、IL-6和IL-1β的浓度。统计分析所有数据均以均值标准差表示。使用邓肯多重极差检验，通过单因素方差分析确定处理间的显著差异。9.2软件。显著性水平被设置为0.05。

结果RESULT.

花生皮提取物中酚类化合物的组成

植物酚类化合物是目前研究最多的植物化学物质之一，因为它们具有生物功能，包括抗氧化和抗炎特性。总多酚含量、总黄酮含量(TFC)、总原花青素含量(TPAC)和总花青素根据品种和提取溶剂的花生皮的含量(TAC)如表1所示。

表1花生皮提取物总多酚含量(毫克GAE/克)、总黄酮含量(毫克CE/克)、总原花青素含量(毫克CE/克)和总花青素含量(毫克C3GE/克)根据品种和提取溶剂不同而不同

在测试的提取溶剂中，发现80%甲醇和80%丙酮是提取多酚化合物的最有效的溶剂系统，与使用的所有其他溶剂系统相比，TPCs的水平在.17至.29毫克GAE/克花生皮之间。TFC的结果倾向于类似于TPC的结果。不同样品中酚含量的回收率受萃取溶剂的极性和特定化合物在萃取过程所用溶剂中的溶解度的影响。当考虑品种对TPC和TFC的影响时，在用80%乙醇、80%丙酮和蒸馏水提取花生皮的情况下，观察到金奎大品种的TPC最高。相比之下，在用80%丙酮和甲醇提取的花生皮的情况下，观察到最高的三氯苯酚，明显高于其他物质，分别为豪克萨宁(.29毫克GAE/克花生皮)和金奎大(.20毫克GAE/克花生皮)。黑皮花生品种多酚含量高与黑皮花生品种花青素含量有关。此外，这些结果与Larrauri等人报告的结果非常一致。他们观察到，用70%乙醇和蒸馏水烘烤和焯水的花生皮的提取率在9.8%至18.0%之间，这些提取物的总多酚含量在至毫克GAE/克之间。

由于花生皮的色素在生理作用中起着重要作用，人们越来越



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